ASP2人胚胎腎細胞轉(zhuǎn)化細胞
ASP2人胚胎腎細胞轉(zhuǎn)化細胞核心產(chǎn)品為構(gòu)建成功的穩(wěn)定轉(zhuǎn)化細胞株,可提供不同基因修飾類型(ASP2過表達、ASP2干擾)的細胞系,配套提供細胞培養(yǎng)說明書、細胞凍存液、復蘇液及質(zhì)量檢測報告(含細胞純度、ASP2基因表達效率、支原體檢測等),同時提供細胞培養(yǎng)技術(shù)支持及定制化基因修飾服務(wù)。該細胞以人胚胎腎細胞為親本,采用慢病毒介導轉(zhuǎn)染等成熟基因編輯技術(shù),將ASP2基因定向?qū)胗H本細胞,經(jīng)嘌呤霉素抗性篩選、Western Blot、Real-time PCR等方法驗證,確保ASP2基因穩(wěn)定表達(過表達細胞系A(chǔ)SP2蛋白表達水平顯著升高,干擾細胞系表達水平顯著下調(diào)),細胞純度≥98%,無支原體、細菌、真菌污染。該細胞適配常規(guī)細胞培養(yǎng)條件,可穩(wěn)定傳代20代以上,生物學特性穩(wěn)定,保留其固有生理功能及ASP2基因調(diào)控特性,廣泛應(yīng)用于急性腎損傷、腎細胞癌等腎臟疾病發(fā)病機制研究、ASP2基因?qū)毎蛲雠c自噬的調(diào)控研究、腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)機制研究及相關(guān)靶向藥物篩選等科研場景,為腎臟病學、分子生物學、腫瘤學等相關(guān)領(lǐng)域的科研探索、藥物研發(fā)提供核心細胞模型,適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實驗室及各級醫(yī)院腎內(nèi)科、腫瘤科科研部門。
構(gòu)建原理
該細胞的構(gòu)建核心基于基因編輯技術(shù),結(jié)合人胚胎腎細胞的生物學特性及ASP2基因的功能特點,實現(xiàn)ASP2基因的精準導入與穩(wěn)定表達,具體核心原理分為兩種常見類型,適配不同科研需求:一是ASP2過表達細胞構(gòu)建原理,將ASP2基因片段克隆至慢病毒表達載體,與輔助質(zhì)粒(psPAX2、pMD2.G等)共轉(zhuǎn)染293T細胞,收集病毒上清后感染人胚胎腎親本細胞,通過嘌呤霉素抗性篩選獲得穩(wěn)定過表達ASP2基因的轉(zhuǎn)化細胞株,用于研究ASP2基因的促凋亡、抑癌及調(diào)控自噬的功能,探究其在腎臟疾病中的作用機制;二是ASP2干擾細胞構(gòu)建原理,構(gòu)建靶向ASP2基因的shRNA慢病毒表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染人胚胎腎親本細胞后篩選穩(wěn)定細胞株,通過Western Blot和Real-time PCR檢測驗證ASP2基因表達水平顯著下調(diào),用于研究ASP2基因沉默后對腎細胞增殖、凋亡、自噬及腫瘤轉(zhuǎn)移能力的影響。此外,所有構(gòu)建的轉(zhuǎn)化細胞系均需經(jīng)過支原體、細菌等污染檢測及細胞活力、傳代能力驗證,確保細胞系的穩(wěn)定性和可靠性,為后續(xù)科研實驗提供優(yōu)質(zhì)細胞模型,同時可通過優(yōu)化培養(yǎng)體系,模擬體內(nèi)腎臟微環(huán)境,提升細胞體外培養(yǎng)的穩(wěn)定性。
產(chǎn)品特點
該細胞以“純度高、穩(wěn)定性好、基因表達精準、適配性廣"為核心,貼合腎臟疾病、腫瘤相關(guān)研究的實際科研需求,核心特點突出,匹配科研實驗對細胞模型的核心訴求。一是基因修飾精準高效,采用慢病毒轉(zhuǎn)染等成熟基因編輯技術(shù),經(jīng)多輪驗證確保ASP2基因穩(wěn)定表達或干擾,無明顯脫靶效應(yīng),能精準模擬腎臟疾病、腫瘤中ASP2基因異常調(diào)控的病理狀態(tài),助力相關(guān)機制研究;二是細胞純度高、無污染,細胞純度≥98%,經(jīng)嚴格檢測無支原體、細菌、真菌及雜細胞污染,確保實驗結(jié)果的準確性,避免雜細胞及污染對實驗的干擾;三是生物學特性穩(wěn)定,細胞生長狀態(tài)良好,可穩(wěn)定傳代20代以上,傳代過程中ASP2基因表達特性不丟失,細胞增殖、凋亡、自噬等生物學行為穩(wěn)定,符合科研實驗對數(shù)據(jù)可重復性的核心要求;四是功能關(guān)聯(lián)性強,保留人胚胎腎細胞的固有特性,同時具備ASP2基因調(diào)控相關(guān)功能,可用于研究ASP2對細胞凋亡、自噬的調(diào)控機制,以及與急性腎損傷、腎細胞癌、腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián),適配多領(lǐng)域科研需求;五是適配性強,可適配體外常規(guī)細胞培養(yǎng)、MTT增殖實驗、平板克隆形成實驗、Western blotting檢測、免疫熒光染色、流式細胞術(shù)等多種實驗場景,同時可用于裸鼠異種移植體內(nèi)實驗,助力體內(nèi)外協(xié)同研究;六是操作便捷,提供完整的細胞復蘇、培養(yǎng)、凍存說明書,細胞復蘇成活率高(≥90%),無需復雜實驗設(shè)備,常規(guī)細胞培養(yǎng)條件即可滿足生長需求,適配各類實驗室操作,同時提供基因表達驗證、細胞培養(yǎng)等專屬技術(shù)指導。
適用實驗場景
該細胞專為腎臟疾病、腫瘤相關(guān)科研實驗設(shè)計,適配多種體外及體內(nèi)實驗場景,核心應(yīng)用包括:一是腎臟疾病發(fā)病機制研究,探究該細胞中ASP2基因表達異常與急性腎損傷、腎細胞癌等疾病的關(guān)聯(lián),明確ASP2通過調(diào)控自噬、細胞凋亡影響腎臟疾病發(fā)生發(fā)展的分子機制,為疾病早期預防和診斷提供理論依據(jù);二是ASP2基因功能研究,通過該細胞開展ASP2基因過表達或沉默實驗,探究其對細胞凋亡、自噬的調(diào)控作用,以及與AMPK-mTOR、Atg5-Atg12等相關(guān)信號通路的關(guān)聯(lián),明確其在細胞生理、病理過程中的核心作用;三是腫瘤相關(guān)機制研究,利用該細胞探究ASP2基因?qū)δ[瘤轉(zhuǎn)移的調(diào)控作用,分析其與E-鈣粘蛋白、β-連環(huán)蛋白及VEGF等相關(guān)蛋白的關(guān)聯(lián),為腫瘤靶向治療研究提供支撐;四是藥物篩選與藥效評估,將該細胞用于針對ASP2基因及相關(guān)信號通路的靶向藥物篩選,通過MTT實驗、流式細胞術(shù)等,評估藥物對該細胞增殖、凋亡、自噬的影響,為腎臟疾病、腫瘤相關(guān)藥物研發(fā)提供可靠的篩選模型;五是分子機制驗證實驗,可用于Western blotting、Real-time PCR、免疫熒光染色等實驗,驗證ASP2基因相關(guān)信號通路的調(diào)控機制,為相關(guān)疾病發(fā)病機制研究提供分子層面的數(shù)據(jù)支撐;六是細胞衰老相關(guān)研究,探究ASP2基因與細胞衰老的關(guān)聯(lián),為細胞衰老相關(guān)疾病的研究提供細胞模型支撐。該細胞適配科研院所、生物醫(yī)藥企業(yè)、高校實驗室及各級醫(yī)院腎內(nèi)科、腫瘤科科研部門,助力相關(guān)科研實驗的順利開展。
備注:(具體細胞培養(yǎng)及實驗操作方法請參考產(chǎn)品說明書)
儲存與注意事項
儲存方面,該細胞凍存狀態(tài)下需置于-80℃超低溫冰箱或液氮中保存,有效期為12個月,凍存時需使用含5-10%DMSO的配套凍存液,采用梯度降溫法凍存(-1~-2℃/min降溫至-25℃以下,再以-5~-10℃/min降溫至-100℃后浸入液氮),避免細胞損傷;復蘇時需快速解凍(37℃水浴1-2分鐘),解凍后立即用70%酒精消毒凍存管,避免進水污染,復蘇后需立即接種至培養(yǎng)瓶,置于37℃、5% CO?、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),復蘇后24小時內(nèi)避免更換培養(yǎng)基,確保細胞適應(yīng)環(huán)境;常規(guī)培養(yǎng)狀態(tài)下,細胞需置于37℃、5% CO?培養(yǎng)箱中,使用含10%胎牛血清的DMEM或RPMI 1640培養(yǎng)基培養(yǎng),定期更換培養(yǎng)基(每2-3天一次),確保細胞正常生長。注意事項包括:產(chǎn)品僅供科研使用,不用于臨床治療診斷;細胞復蘇時需快速解凍,避免反復凍融,解凍后及時接種,防止細胞活力下降,凍存管取出時需注意防護,避免凍傷;培養(yǎng)過程中需嚴格遵循無菌操作原則,禁止共用培養(yǎng)耗材,避免細胞污染,若發(fā)生污染切勿進行半量換液;細胞傳代時需控制消化時間,避免過度消化導致細胞損傷,傳代比例建議為1:3-1:5,確保細胞生長密度適宜;檢測過程中(如Western blotting、Real-time PCR),需嚴格遵循實驗操作規(guī)范,確保ASP2基因表達及相關(guān)分子檢測結(jié)果準確;過期細胞及污染細胞嚴禁使用,詳細安全信息請參照產(chǎn)品SDS文件;運輸過程中需采用干冰運輸,避免高溫、劇烈震蕩,確保細胞活力,運輸后需及時復蘇或轉(zhuǎn)移至對應(yīng)儲存環(huán)境。
訂購信息
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以上信息僅供參考,具體請已產(chǎn)品說明書為準。